RFLP e os aplicativos de análise de DNA

O polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP) é um método molecular de análise genética que permite que indivíduos sejam identificados com base em padrões únicos de enzima de restrição corte em regiões específicas do DNA.

Também conhecida como Análise RFLP, a técnica tira proveito do polimorfismos nos códigos genéticos de cada pessoa. Embora todos os membros de uma espécie tenham essencialmente a mesma composição genética, essas pequenas diferenças são responsáveis ​​por variações no fenótipo, como aparência ou metabolismo, entre indivíduos.

A técnica de análise de RFLP envolve o corte de uma região específica de DNA com variabilidade conhecida, com enzimas de restrição, separando os fragmentos de DNA por eletroforese em gel de agarose e determinando o número de fragmentos e tamanhos relativos.

Uma enzima de restrição é uma enzima, uma molécula de proteína, que corta o DNA nos locais de restrição. Em essência, a amostra de DNA é dividida e digerida pelas enzimas de restrição. Os fragmentos resultantes são separados de acordo com seus comprimentos, e o padrão dos tamanhos dos fragmentos será diferente para cada indivíduo testado.

O processo completo de RFLP requer rotulagem da sonda, fragmentação do DNA, eletroforese, transferência, hibridação, lavagem e autoradiografia. A RFLP detectada é visualizada usando um filme de raios-X na auto-radiografia, onde os fragmentos de DNA podem ser visualizados e analisados ​​depois de separados por eletroforese.

Algumas das aplicações para análise de RFLP incluem:

• Impressão digital do DNA: Os cientistas forenses podem usar a análise RFLP para identificar suspeitos com base em amostras de evidências coletadas nas cenas de crimes.
• Paternidade: O RFLP também é usado na determinação de paternidade ou no rastreamento de ascendência.
• Diversidade genética: A técnica pode ser usada no estudo da evolução e migração da vida selvagem, no estudo de padrões de reprodução em populações animais e na detecção e diagnóstico de certas doenças.

A técnica de usar a detecção RFLP de variação nos genomas é uma ferramenta vital no mapeamento do genoma e na análise de doenças genéticas. Se a localização de um determinado gene da doença estiver sendo procurada em um determinado cromossomo, os pesquisadores deverão analise o DNA de membros de uma família com a doença e procure padrões semelhantes de herança na RFLP alelos.

Depois que um gene da doença é localizado, a realização de análises de RFLP em outros membros da família pode revelar um portador dos genes mutantes ou sinalizar o risco geral da doença. É importante observar que a técnica RFLP não é amplamente usada agora que técnicas mais novas e robustas são usadas para análise de DNA em ciências forenses e em vários outros campos.

Infelizmente, a técnica de análise de RFLP é tediosa e lenta. Além de exigir uma grande quantidade de DNA da amostra - a amostra geralmente precisa ter o tamanho de um quarto, o que é relativamente grande para amostras de DNA - o processo, desde a identificação da sonda até a lavagem e a autoradiografia, pode levar até um mês inteiro para completo.

Os resultados do Projeto Genoma Humano substituíram praticamente a necessidade de RFLP. O projeto permitiu determinar toda a sequência do DNA encontrado nas células humanas, o genoma humano, e identificar todos os genes no genoma humano.