Protocolo ou receita de buffer de eletroforese de 10X TBE

TBE e TAE são usados ​​como tampões em biologia molecular, principalmente para eletroforese de ácidos nucleicos. Os tampões Tris são usados ​​sob condições de pH ligeiramente básicas, como na eletroforese de DNA, porque isso mantém o DNA solúvel na solução e desprotonado para que seja atraído pelo eletrodo positivo e migre através de um gel. EDTA é um ingrediente na solução, porque este comum agente quelante protege os ácidos nucleicos da degradação por enzimas. O EDTA quela catiões divalentes que são cofatores de nucleases que podem contaminar a amostra. No entanto, uma vez que o cátion de magnésio é um cofator para a DNA polimerase e enzimas de restrição, a concentração de EDTA é mantida propositadamente baixa (concentração de cerca de 1 mM).

Você não precisa esterilizar a solução. Embora a precipitação possa ocorrer após um período de tempo, a solução-mãe ainda é utilizável. Você pode ajustar o pH usando um medidor de pH e adição gota a gota de concentrado ácido clorídrico (HCl). Não há problema em armazenar o tampão TBE à temperatura ambiente, embora você possa filtrar a solução padrão por um filtro de 0,22 mícron para remover partículas que promovam a precipitação.

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O uso acidental de uma solução de estoque 5X ou 10X fornecerá resultados ruins, pois será gerado tanto calor. Além de fornecer uma resolução ruim, a amostra pode ser danificada.

Embora TBE e TAE sejam tampões comuns de eletroforese, existem outras opções para soluções condutoras de baixa molaridade, incluindo tampão de borato de lítio e tampão de borato de sódio. O problema com TBE e TAE é que os buffers baseados em Tris limitam o campo elétrico que pode ser usado em eletroforese, porque muita carga causa uma temperatura descontrolada.

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