O tampão TBE (Tris-borato-EDTA) é uma solução tampão composta por base Tris, ácido bórico e EDTA (ácido etilenodiaminotetracético). Este tampão é frequentemente usado para eletroforese em gel de agarose na análise de produtos de DNA resultantes de amplificação por PCR, protocolos de purificação de DNA ou experimentos de clonagem de DNA.
TBE Usos
O tampão TBE é particularmente útil para a separação de fragmentos de DNA menores (MW <1000), como pequenos produtos de enzima de restrição digere. O TBE tem uma capacidade maior de buffer e fornecerá uma resolução mais nítida que o buffer TAE. O tampão TAE (Tris-acetato-EDTA) é uma solução composta por base Tris, ácido acético e EDTA.
A TBE geralmente é mais cara que a TAE e inibe o DNA ligase, o que pode causar problemas se se pretender etapas subsequentes de purificação e ligação do DNA. Com as três etapas simples a seguir, saiba como fazer o buffer TBE. Não deve demorar mais de 30 minutos para criar.
O que você precisa
Para fazer o tampão TBE, você precisará de apenas quatro substâncias. Os itens restantes nesta lista são equipamentos. As quatro substâncias necessárias são sal dissódico EDTA, base Tris, ácido bórico e água desionizada.
Quanto ao equipamento, você precisará de um medidor de pH e padrões de calibração, conforme apropriado. Além disso, você precisará de copos ou frascos de 600 mililitros e 1500 mililitros. Para completar, as suas necessidades de equipamento são cilindros graduados, barras de agitação e placas de agitação.
Verifique o inventário no laboratório que você usará para garantir que você tenha tudo o que precisa antes de começar. Nada é pior do que ter que parar no meio da preparação de uma solução, porque você ficou sem os materiais adequados.
Se o seu laboratório estiver na escola ou no local de trabalho, verifique com o pessoal adequado para ver se eles possuem todos os itens em estoque. Fazer isso pode economizar tempo e energia no final.
O peso da fórmula é abreviado como FW. É o peso atômico de um elemento multiplicado pelo número de átomos de cada elemento em uma fórmula, adicionando todas as massas de cada elemento.
Solução de Estoque de EDTA
Uma solução EDTA deve ser preparada com antecedência. O EDTA não entrará completamente na solução até que o pH seja ajustado para cerca de 8,0. Para uma solução-mãe de 500 mililitros de EDTA 0,5 M, pese 93,05 gramas de sal dissódico EDTA (FW = 372,2). Em seguida, dissolva-o em 400 mililitros de água desionizada e ajuste o pH com NaOH (hidróxido de sódio). Depois disso, complete a solução para um volume final de 500 mililitros.
Solução conservada em estoque de TBE
Faça uma solução concentrada (5x) de TBE pesando 54 gramas de base Tris (FW = 121,14) e 27,5 gramas de ácido bórico (PV = 61,83) e dissolvendo ambos em aproximadamente 900 mililitros de água. Em seguida, adicione 20 mililitros de 0,5 M (molaridade ou concentração) de EDTA (pH 8,0) e ajuste a solução para um volume final de 1 litro. Esta solução pode ser armazenada à temperatura ambiente, mas um precipitado se formará em soluções mais antigas. Armazene o tampão em garrafas de vidro e descarte-o se um precipitado se formar.
Solução de trabalho de TBE
Para electroforese em gel de agarose, pode ser utilizado um tampão TBE a uma concentração de 0,5x (diluição 1:10 do material concentrado). Dilua a solução estoque em 10x em água deionizada. As concentrações finais de soluto são 45 mM de Tris-borato e 1 mM (milimolar) de EDTA. O buffer agora está pronto para uso em executando um gel de agarose.