O tampão TAE é uma solução composta por base Tris, ácido acético e EDTA (Tris-acetato-EDTA). Historicamente, é o tampão mais comum usado para gel de agarose eletroforese nas análises de produtos de DNA resultantes de PCR amplificação, DNA protocolos de purificação ou Clonagem de DNA experimentos.
Este buffer possui baixa força iônica e baixa capacidade de buffer. É mais adequado para eletroforese de grandes pedaços de DNA (> 20 kilobases) e precisará ser substituído com frequência ou recirculado por períodos de gel mais longos (> 4 horas). Com isso em mente, convém fazer vários lotes do buffer.
Como o buffer é fácil de executar e as etapas podem ser executadas rapidamente, fazer mais de um lote por vez não deve ser particularmente demorado ou difícil. Usando as instruções abaixo, leva apenas 30 minutos para fazer o buffer TAE.
O que você precisa para o buffer TAE
Como fazer o buffer TAE requer apenas um conjunto rápido e simples de instruções, o número de materiais necessários para ele não é excessivo. Você só precisará de sal dissódico de EDTA (ácido etilenodiaminotetracético), base Tris e ácido acético glacial.
A produção do buffer também requer um medidor de pH e padrões de calibração, conforme apropriado. Você também precisará de copos ou frascos de 600 mililitros e 1500 mililitros, além de cilindros graduados. Finalmente, você precisará de água deionizada, barras de agitação e placas de agitação.
Nas instruções a seguir, o peso da fórmula (a massa atômica de cada elemento é multiplicada pelo número de átomos e a massa de cada um é adicionada) é abreviada como FW.
Preparar uma solução de estoque de EDTA
Uma solução EDTA é preparada com antecedência. O EDTA não entrará completamente em uma solução até que o pH seja ajustado para cerca de 8,0. Para um estoque de 500 mililitros solução de EDTA 0,5 M (molaridade ou concentração), pesar 93,05 gramas de sal dissódico de EDTA (FW = 372,2). Dissolva-o em água desionizada de 400 mililitros e ajuste o pH com hidróxido de sódio (NaOH). Complete a solução para um volume final de 500 mililitros.
Crie sua solução de estoque
Faça uma solução concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramas de base Tris (FW = 121,14) e dissolvendo-a em aproximadamente 750 mililitros de água desionizada. Adicione cuidadosamente 57,1 mililitros de ácido glacial e 100 mililitros de 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Depois disso, ajuste a solução para um volume final de 1 litro. Esta solução estoque pode ser armazenada em temperatura ambiente. O pH deste tampão não é ajustado e deve ser de cerca de 8,5.
Preparar uma solução de trabalho do tampão TAE
A solução de trabalho de 1x tampão TAE é feita simplesmente diluindo a solução estoque em 50x em água desionizada. As concentrações finais de soluto são Tris-acetato 40 mM (milimolar) e EDTA 1 mM. O tampão está pronto para uso na execução de um gel de agarose.
Empacotando
Verifique o inventário antes de começar para se certificar de que possui todos os materiais acima para o buffer TAE. Seu pessoal de suprimentos deve poder informar se eles têm todos os itens necessários em estoque. Você não quer acabar perdendo algo no meio do procedimento.