PBS ou tamponado com fosfato solução salina é uma solução tampão isso é particularmente valioso porque imita a concentração de íons, osmolaridade e pH dos fluidos corporais humanos. Em outras palavras, é isotônico para soluções humanas, portanto, é menos provável que cause danos às células, toxicidade ou precipitação indesejada em pesquisas biológicas, médicas ou bioquímicas.
Composição química PBS
Existem várias receitas para preparar a solução de PBS. A solução essencial contém água, hidrogenofosfato de sódio e Cloreto de Sódio. Algumas preparações contêm cloreto de potássio e di-hidrogenofosfato de potássio. O EDTA também pode ser adicionado na preparação celular para evitar aglomeração.
Solução salina tamponada com fosfato não é ideal para uso em soluções que contêm cátions divalentes (Fe2+, Zn2+) porque pode ocorrer precipitação. No entanto, algumas soluções de PBS contêm cálcio ou magnésio. Além disso, lembre-se de que o fosfato pode inibir reações enzimáticas. Esteja particularmente ciente dessa potencial desvantagem ao trabalhar com DNA. Embora o PBS seja excelente para a ciência fisiológica, esteja ciente de que o fosfato em uma amostra tamponada com PBS pode precipitar se a amostra for misturada com etanol.
Uma composição química típica de 1X PBS tem uma concentração final de 10 mM de PO43−, 137 mM de NaCl e 2,7 mM de KCl. Aqui está a concentração final de reagentes na solução:
| Sal | Concentração (mmol / L) | Concentração (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8.0 |
| KCl | 2.7 | 0.2 |
| N / D2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2PO4 | 1.8 | 0.24 |
Protocolo para fabricação de solução salina tamponada com fosfato
Dependendo do seu objetivo, você pode preparar 1X, 5X ou 10X PBS. Muitas pessoas simplesmente compram comprimidos de tampão PBS, dissolvem-nos em água destilada e ajustam o pH conforme necessário com ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. No entanto, é fácil fazer a solução do zero. Aqui estão receitas para solução salina tamponada com fosfato 1X e 10X:
Reagente |
Montante adicionar (1 ×) |
Concentração final (1 ×) |
Valor a adicionar (10 ×) |
Concentração final (10 ×) |
| NaCl | 8 g |
137 mM | 80 g |
1,37 milh |
| KCl | 0,2 g |
2,7 mM | 2 g |
27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g |
10 mM | 14,4 g |
100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g |
1,8 mM | 2,4 g |
18 mM |
Opcional: | ||||
| CaCl2 • 2H2O | 0,133 g |
1 mM | 1,33 g |
10 mM |
MgCl2 • 6H2O |
0,10 g | 0,5 mM |
1,0 g | 5 mM |
- Dissolver os sais de reagente em 800 ml de água destilada.
- Ajuste o pH para o nível desejado com ácido clorídrico. Geralmente isso é 7.4 ou 7.2. Use um medidor de pH para medir o pH, não o papel de pH ou outra técnica imprecisa.
- Adicione água destilada para obter um volume final de 1 litro.
Esterilização e armazenamento da solução de PBS
A esterilização não é necessária para algumas aplicações, mas se você estiver esterilizando, dispense a solução em alíquotas e autoclave por 20 minutos a 15 psi (1,05 kg / cm2) ou use esterilização por filtro.
Solução salina tamponada com fosfato pode ser armazenado em temperatura ambiente. Também pode ser refrigerado, mas as soluções 5X e 10X podem precipitar quando resfriado. Se você precisar resfriar uma solução concentrada, primeiro armazene-a à temperatura ambiente até ter certeza de que os sais se dissolveram completamente. Se ocorrer precipitação, o aquecimento da temperatura os trará de volta à solução. O prazo de validade da solução refrigerada é de 1 mês.
Diluindo uma solução 10X para fazer 1X PBS
10X é uma solução concentrada ou estoque, que pode ser diluída para formar uma solução normal ou 1X. Uma solução 5X deve ser diluída 5 vezes para fazer uma diluição normal, enquanto uma solução 10X deve ser diluída 10 vezes.
Para preparar uma solução de trabalho de 1 litro de 1X PBS a partir de uma solução 10X PBS, adicione 100 ml da solução 10X a 900 ml de água. Isso altera apenas a concentração da solução, não a quantidade grama ou molar dos reagentes. O pH não deve ser afetado.
PBS versus DPBS
Outra solução tampão popular é a solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco ou DPBS. O DPBS, como o PBS, é usado para pesquisas biológicas e tampões na faixa de pH de 7,2 a 7,6. Pode ser armazenado em temperatura ambiente. A solução da Dulbecco contém uma menor concentração de fosfato. São 8,1 mM de íons de fosfato, enquanto o PBS comum é 10 mM de fosfato. A receita para 1x DPBS é:
| Reagente | Valor a adicionar (1x) |
| NaCl | 8,007 g |
| KCl | 0,201 g |
| N / D2HPO4 | 1.150 g |
| KH2PO4 | 0,200 g |
| Opcional: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCl2• 6H2O | 0,102 g |
Dissolva os sais em 800 mL de água. Ajuste o pH para 7,2 a 76 usando ácido clorídrico. Ajuste o volume final para 1000 mL com água. Autoclave a 121 ° C por 20 minutos.
Fontes
- Dulbecco, R.; et al. (1954). "Formação de placas e isolamento de linhas puras com vírus da poliomielite". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
- "Solução salina tamponada com fosfato (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Imprensa do laboratório de Cold Spring Harbor.